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怎么讓自己成為ELISA實驗大神?

發(fā)布時間：2023-09-19   點擊次數(shù)：785次

ELISA實驗步驟少，流程短，購買的即用型試劑盒也都有指導(dǎo)性很強的操作說明書，單次實驗 3-6 小時即可得到結(jié)果，實驗小白也可以很快上手。

 試劑盒回溫




按照說明書要求，取出試劑盒內(nèi)組分，搖勻，置于室溫（20-25℃）充分回溫。若回溫不充分，可能會造成檢測結(jié)果存在較大偏差。



2  樣品及試劑準(zhǔn)備

1
樣品準(zhǔn)備


  • 按照說明書要求選取和處理樣品，如血清樣品應(yīng)避免使用溶血或凝固不全的樣品。

  • 樣品稀釋時，應(yīng)首先保證樣品已恢復(fù)至室溫，選用一次性樣品稀釋板稀釋樣品，然后用排槍轉(zhuǎn)移至ELISA板，保證樣品孵育時間一致。禁止使用具有吸附性的細胞培養(yǎng)板。

  • 合理安排檢測量，避免ELISA板過多，造成洗板等待時間過長。


2
洗滌液配制

配置洗滌液的蒸餾水或去離子水也需提前回溫。若環(huán)境溫度較低，可置于25℃恒溫箱內(nèi)回溫。

3
濃縮酶標(biāo)抗體配制
按說明書配置方法，現(xiàn)用現(xiàn)配。建議使用一次性離心管配制，渦旋振蕩，充分混勻


No.3  操作注意事項


1
加樣


  • 吸取液體時選用的移液器量程和所需量接近，添加通用試劑時可反向移液，減小誤差。

  • 樣品開蓋時盡量遠離稀釋板，防止液滴迸濺到稀釋板孔中。

  • 轉(zhuǎn)移樣品時稀釋板在上，ELISA板在下，防止交叉污染。

2
溫育


加液結(jié)束后加蓋封板膜，使用恒溫恒濕培養(yǎng)箱（注意要提前打開培養(yǎng)箱，確保孵育時到達所需溫度），若培養(yǎng)箱不能保證恒濕條件，可自制濕盒，避免培養(yǎng)箱內(nèi)過于干燥，致使孔內(nèi)樣品蒸發(fā)。

3
洗板

洗滌時可使用自動洗板機或多通道移液器


  • 手動洗板時，快速翻轉(zhuǎn)ELISA板將孔內(nèi)溶液甩出，避免孔間交叉污染。

  • 每次加入洗滌液后，輕輕震蕩ELISA板后甩出洗滌液，確保洗滌充分。

  • 最后一次洗滌去除洗滌液前，確保下一步要添加的試劑可直接使用，勿使ELISA板處于干燥狀態(tài)下的時間超過一定時限。

  • 最后一次洗滌后，將ELISA板置于吸水紙上輕輕拍干。


4
底物顯色

底物溶液需避光放置，加樣時動作迅速，板間加樣時間差距不宜過大。室溫下避光孵育。



5
終止反應(yīng)


加終止液時動作迅速，加完后充分混勻再讀取數(shù)值。



6
讀取計算

  • 加入終止液后5分鐘內(nèi)完成讀數(shù)，避免因反應(yīng)時間過長，影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

  • 讀數(shù)前打開酶標(biāo)儀，確保酶標(biāo)儀充分預(yù)熱通過自檢，使結(jié)果更穩(wěn)定。

  • 酶標(biāo)儀需定期校準(zhǔn)，避免讀數(shù)存在過大偏差。


No.4  其他注意事項




? 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

? 試劑盒嚴(yán)格按照說明書規(guī)定溫度（一般2-8℃）保存。

? 使用微量移液器時，吸取不同的液體后要注意更換槍頭，防止污染。

? 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。

? 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

? 在儲存和溫育時避免強光直接照射。和檢測裝置。



ELISA實驗現(xiàn)在已成為實驗室最為常見的實驗，幾乎人人都能做，但真正做好的沒有幾個，究其原因就是步驟比較簡單，一學(xué)就會，卻往往抓不往關(guān)鍵，一個小環(huán)節(jié)的錯誤，最終會影響整個實驗結(jié)果，注意以上這些可以幫助我們高效高質(zhì)的完成ELISA試驗。