試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被大鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
原理:將抗原與固相載體相連結(jié),形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加入特異性一抗與固相抗原相結(jié)合,形成固相抗原抗體復合物。經(jīng)洗滌后,加酶標二抗。固相免疫復合物中的抗體與酶標二抗結(jié)合,從而間接地標記上酶。洗滌后,加底物顯色。
優(yōu)點:酶標二抗可加強信號,提高靈敏度;靈活性更大,同一酶標二抗可應(yīng)用于多種不同的一抗;不直標一抗,可保留更多的免疫反應(yīng)性;成本更低,使用標記抗體更少。
缺點:交叉反應(yīng)幾率升高。